貨號(hào)：F3512S

儲(chǔ)存條件：-20℃

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Nt.BspQl 是一種切刻內(nèi)切酶，僅切割 dsDNA 底物的一條鏈，在dsDNA 底物上產(chǎn)生切口，而不切開(kāi) dsDNA。

建議反應(yīng)條件：1x Cut Buffer，50°C溫育；參照“DNA 酶切流程"配制反應(yīng)體系。

本品在 37°C進(jìn)行酶切反應(yīng)時(shí)，有 100%的活性。

失活條件：80℃溫育 20 min。

活性定義

1個(gè)活性單位(U)是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，50℃ 1h內(nèi)完quan酶切1μg 超螺旋pUC19 DNA 轉(zhuǎn)化成開(kāi)環(huán)形式所需的酶量。

質(zhì)量控制

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

將10 U Nt.BspQl與超螺旋 pUC19 DNA 底物在 50'C溫育 16 h,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)開(kāi)環(huán)DNA無(wú)變化。

RNase 殘留檢測(cè)

將10 U Nt.BspQl與 500 ng RNA 在 37°C溫育1 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)超過(guò) 90% 的 RNA 仍保持完整。

使用方法

1. DNA 酶切流程

1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯fen、氣仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響Nt.BspQI酶活性;

b. 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋)，然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

2）50℃溫育 30 min~1 h；

3）80°C溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過(guò)吸附柱或苯fen/氯仿純化終止反應(yīng)。

2.注意事項(xiàng)

1）反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過(guò)總體積的 10%，避免酶中過(guò)多的甘油引起星號(hào)活性；

2）限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA 或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響