BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒

貨號(hào)：B5001

存儲(chǔ)條件：冰袋運(yùn)輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）置于4℃保存，有效期2年。

產(chǎn)品規(guī)格：

BCA試劑A   100ml

BCA試劑B   3ml

蛋白標(biāo)準(zhǔn)品   2x1ml (5mg/ml)

PBS溶液     10ml

產(chǎn)品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+，產(chǎn)生一種紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。BCA蛋白濃度測(cè)定法實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的簡(jiǎn)便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為用戶制作標(biāo)準(zhǔn)曲線提供了便利。該BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒可用于比色皿法檢測(cè)，也可用于微孔板法檢測(cè)。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質(zhì)帶來(lái)的影響。后者操作簡(jiǎn)單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過(guò)，由于其在檢測(cè)中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低最di檢測(cè)水平。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）靈敏度高，最小檢測(cè)蛋白量可達(dá)0.2μg，檢測(cè)濃度下限達(dá)10μg/mL(在20~1000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系）。

2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒顯色所用時(shí)間短。比傳統(tǒng)的Lowry法檢測(cè)速度約快4倍。

3）線性范圍廣，20-1000μg/mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。

4) 不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響, BCA法測(cè)定蛋白濃度的最da優(yōu)點(diǎn)是蛋白濃度的測(cè)定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM; β-巰基乙醇低于0.01%。

操作說(shuō)明

BCA 工作液配制：

將試劑A和試劑B按照體積比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL試劑A與1mL試劑B混合，配成51mL BCA工作液。兩者混合時(shí)會(huì)有沉淀形成，徹di混勻后沉淀消失。

微孔板測(cè)定程序：（工作范圍 20-2000 μg/ml）

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫wan全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液用 PBS 溶液稀釋至 100µl使其終濃度為 1.0 mg/ml。

2. 按照下表配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液：

3. 將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到微孔板中，并用 PBS 補(bǔ)足到 20 µl

4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混勻, 37 ℃放置30分鐘； 注：也可以室溫放置2小時(shí),或 60 ℃放置30分鐘。BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí),顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低, 適合在較高溫度孵育,或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

5. 測(cè)定 562 nm處的吸光值， 并記錄讀數(shù)； 以不含BSA的樣品的光吸收值作為空白對(duì) 照。

6. 以A562為縱坐標(biāo), BSA含量為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 計(jì)算樣品中的蛋白濃度. 如果蛋白濃度不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi), 請(qǐng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

試管測(cè)定程序：（工作范圍 20-1000 μg/ml）

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫wan全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入600μL PBS溶液稀釋至750µl，使其終濃度為1.0 mg/ml。

2、按照下表配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液：

3. 將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到試管中，并用 PBS 補(bǔ)足到100 µl；

4. 向試管中加入 2ml BCA 工作液，混勻，37 ℃放置30分鐘；

5 、6 步驟同上。

6. 注意事項(xiàng)

1）BCA蛋白測(cè)定法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，需注意保持定時(shí)和定溫，以確保精確定量。

2）長(zhǎng)期保存，若發(fā)現(xiàn)BCA試劑A或者試劑B有沉淀發(fā)生。請(qǐng)37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染，則應(yīng)丟棄。

3）實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，提高上樣量的精確度。

4）每次測(cè)定都需做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，因?yàn)轱@色反應(yīng)與溫度和時(shí)間的變化有關(guān)，精準(zhǔn)蛋白定量宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5）本公司所有產(chǎn)品僅限用于研發(fā)，必須專業(yè)人員操作同時(shí)佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！