Firefly Luciferase Assay Kit（螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒）

貨號：DR024-100T

儲存條件

-80℃保存。螢火蟲螢光素酶檢測液（B+C）混合液不可反 復(fù)凍融，建議進(jìn)行小批量分裝，并于-20℃（最長可儲存1個(gè)月）或-80℃（最長可儲存 1 年）條件下儲存。

產(chǎn)品介紹

真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報(bào)告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報(bào)告基因檢測zui常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。能夠檢測最di 10-20 mol 的螢光素酶，在 10-14 至 10-20 mol 的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)

1. 快速：細(xì)胞裂解在 10-15 min 內(nèi)完成。

2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

3. 靈敏：能夠檢測最di10-20 mol 的螢光素酶。

4. 酶的濃度線性范圍可達(dá) 8 個(gè)數(shù)量級。

使用方法

1. 細(xì)胞裂解

（1）將轉(zhuǎn)入報(bào)告基因的細(xì)胞中的培養(yǎng)基移除，加 PBS 輕輕洗滌（貼壁細(xì)胞可直接進(jìn)行此操作，懸浮細(xì)胞要離心收集細(xì)胞）。按如下方案加入 1×Lysis Buffer(用無菌水按 4:1 稀釋A 組分)，然后將培養(yǎng)板放在微型震蕩器上室溫震蕩 15 min，充分裂解細(xì)胞。

注：裂解產(chǎn)物可室溫保存 6 h，-70℃可長期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）。

（2）將充分裂解后的裂解產(chǎn)物，10000-15000 rpm 離心 3-5min。離心后將上清液移入新的 EP 管中進(jìn)行后續(xù)檢測。

2. 螢光素酶檢測

（1）按照儀器說明書將熒光測定儀打開，設(shè)定參數(shù)，測定時(shí)間為 10 s，測定間隔為 2 s。

（2）將細(xì)胞裂解產(chǎn)物按照 20~100 µL 的體積加入測量管中（保持每次樣品量一致），另外加入 100 µL 螢火蟲螢光素酶檢測液，充分混勻后測定 RLU（Relative light unit）。

注：螢火蟲螢光素酶檢測液不能反復(fù)凍融，若單次實(shí)驗(yàn)用量較少，建議按照單次使用量分裝成小規(guī)格。

注意事項(xiàng)

1. 溫度會對酶的活性產(chǎn)生影響，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用。

2. 如果單管熒光測定儀測定，每個(gè)樣品與測定試劑混合后到測定前的時(shí)間應(yīng)保持一致。

3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)波長為 560 nm。

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5. 本產(chǎn)品僅用于科研。