產(chǎn)品貨號(hào)：F7514S

儲(chǔ)存條件：-20℃

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Pcil 屬于 Type IIP 型限制性內(nèi)切酶，來源于檸檬色動(dòng)性球菌(Planococcus citreus)，經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)后獲得。Pcil 使用專屬反應(yīng)緩沖液 Cut Buffer C，可實(shí)現(xiàn)快速酶切；可兼容LabFD 緩沖液進(jìn)行雙酶切，但長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)可能出現(xiàn)星號(hào)活性。。

建議反應(yīng)條件：1×Cut buffer C；37℃溫育；參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件：80℃溫育 20 min。

活性定義：1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，37℃ 1 h內(nèi)wan全酶切 1 µg p615 所需的酶量。

質(zhì)量控制

功能活性檢測(cè)

37℃下，在 20ul 反應(yīng)體系中，10U PciI 能夠在 15min 內(nèi)wan全消化1ug p615。

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

37℃下，將 10U PciI 與1ug p615 共同溫育 3h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)

37℃下，使用 10 U PciI 消化 DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含ben酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響PciI酶活性。

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

（3）37℃溫育 15min~60min；

（4）80℃溫育 20 min 即可使酶失活，或者通過吸附柱或ben酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

2. 注意事項(xiàng)

① 反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的 10%，避免酶中過多的甘油引起星號(hào)活性;

② 限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA 或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

③ Pcil 可以和其他 LabFD系列限制酶使用 LabFD緩沖液進(jìn)行雙酶切，但不建議長(zhǎng)時(shí)間(超過3 h)反應(yīng)。

不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自 LABLEAD 限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。