貨號：B5003

存儲條件：冰袋運(yùn)輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋?標(biāo)準(zhǔn)品（BSA）?時(shí)間不用，可置于-20℃保存，有效期12個?。

產(chǎn)品說明

快速蛋?定量試劑盒的原理與傳統(tǒng)BCA蛋?定量法類似，但采用了?種不同于BCA(Bicin-choninicAcid)的全新特殊的螯合劑，從而實(shí)現(xiàn)了對蛋?質(zhì)濃度進(jìn)?快速、穩(wěn)定、靈敏的測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋?質(zhì)分?中的肽鍵能與Cu2+形成絡(luò)合物，將Cu2+還原成Cu+，Cu+與螯合物結(jié)合，從而發(fā)?顏?反應(yīng)。本試劑盒中的螯合劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合，只需室溫孵育5min即可形成穩(wěn)定的橙???溶性復(fù)合物，而傳統(tǒng)BCA法則需在37℃下孵育30min才可完成顏?反應(yīng)。該橙??的復(fù)合物在480nm處有強(qiáng)光吸收值，顏?的深淺與蛋?質(zhì)濃度成正?，可根據(jù)吸收值的?小來測定蛋?質(zhì)的含量。本試劑盒含有?系列濃度的蛋?質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液(BSA溶液)，即取即用，?需稀釋，方便快捷。

1）簡單快速---室溫5min完成顯?反應(yīng)。

2）方便快捷---提供BSA即用型蛋?標(biāo)準(zhǔn)品，省去稀釋步驟。

3）線性范圍廣---靈敏檢測20-2000μg/mL濃度范圍內(nèi)有較好的線。

4）兼容性好---不受?部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。 

操作說明（以微孔酶標(biāo)儀為例）

一、配置顯色工作液

1.計(jì)算顯色工作液總量

?作液總量= (BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個數(shù)＋待測樣本個數(shù))×復(fù)孔數(shù)×每個樣本顯??作液體積

舉例：BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本個數(shù)為8個，待測樣本個數(shù)3個，復(fù)孔數(shù)3個。

顯??作液總量=(8個BSA標(biāo)準(zhǔn)品樣本＋3個待測樣本)×3個復(fù)孔×200μL(每個樣本?作液體積) = 6.6mL

2.根據(jù)計(jì)算出的顯色工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50:1的體積比，配制顯色工作液，充分混勻。

【注意】

1）試劑B剛加?試劑A時(shí)，會出現(xiàn)灰藍(lán)?沉淀，但只需混勻?秒鐘，沉淀就會消失，形成透亮的綠?溶液；

2）建議?作液現(xiàn)用現(xiàn)配，在室溫下，?作液會逐漸變?yōu)樯罹G?，但只要在1.5h內(nèi)使用，對定量的準(zhǔn)確性不會造成影響；

3）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA?作液時(shí)，多配制1~2個孔。

二、定量檢測

1. 分別取即用型BSA標(biāo)準(zhǔn)品①~⑧各20μL加到96孔板中( BSA標(biāo)準(zhǔn)品使用前須充分溶解搖勻)；

2. 用 1xPBS 或 0.9%生理鹽水將樣品適當(dāng)稀釋(可以多作幾個梯度，如2 倍、4 倍、8 倍稀釋)，加 20 μL 到 96 孔板的樣品孔中。

3. 各孔加入 200 uL 顯色工作液，充分混勻，蓋上 96 孔板蓋，室溫孵育 5min，即可進(jìn)行檢測。

【注意】由于顏色反應(yīng)速度較快，須保證在 20-30 min 之內(nèi)完成讀值。如果必須在 30 min 后讀值，可提前加入 50 μL 1M HCI 終止反應(yīng)。 

4 . 用酶標(biāo)儀測定每個樣品及 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的 A₄₈₀，注意要減去空白對照( 標(biāo)準(zhǔn)品① +工作液)的 A₄₈₀;

5. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

【注意】數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯誤的值。待測樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制的曲線，可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出待測樣品的濃度。

6.注意事項(xiàng)

1)本產(chǎn)品可以采用酶標(biāo)儀(微孔檢測法)或者分光光度計(jì)(試管檢測法)測定蛋白濃度，如使用普通的分光光度計(jì)測定，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量使不小于最小檢測體積， 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測定蛋白濃度時(shí)，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。

2)完成室溫孵育5 min 后，須在 20~30 min 內(nèi)完成檢測，否則會影響蛋白定量的準(zhǔn)確度。

3)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，提高上樣量的精確度。

4)每次測定都需做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，因?yàn)轱@色反應(yīng)與溫度和時(shí)間的變化有關(guān)，精準(zhǔn)蛋白定量宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5)如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表)，可采用其它蛋白定量產(chǎn)品。

6)本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi),

7)為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。