考馬斯亮蘭R-250

產(chǎn)品貨號：0472-1

儲存條件：室溫

產(chǎn)品描述

考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有 G250 和 R250 兩種，結(jié)構(gòu)上前者比后者多 了 2 個甲基，命名上“G"為 Green 的縮寫，因 G250 的藍(lán)色染料泛淺綠色；命名上“R"為 Red 的縮寫，因 R250 的藍(lán)色染料呈 微紅色調(diào)；“250"表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實驗中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是： 通過與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力，考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強但非共價鍵連接的復(fù)合物。 蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。 考馬斯亮藍(lán) R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高 5 倍，可達(dá) 0.1 µg 蛋白。R250 染色后需要褪色，才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察。 考馬斯亮藍(lán) G250 的檢測靈敏度雖然較低，但也可替代 R250，使用一種快速而簡單的方法進(jìn)行蛋白染色。因其具有以 下特性，即在低于 pH 2.0 時，溶液無色；pH 7.0 時溶液呈深藍(lán)黑色；若發(fā)生酸化，溶液呈現(xiàn)透明的棕褐色。當(dāng) G250 與蛋白 結(jié)合，溶液又回到藍(lán)色，主要因為蛋白分子周圍具有更偏中性的 pH 環(huán)境。合適條件下，當(dāng)把膠放在酸化的 G250 溶液中染 色，顯示出藍(lán)色的蛋白條帶，背景呈淺琥珀色。此種方法條帶快速顯色，且背景顏色也很淺使得條帶看起來很清楚，則不需 要做褪色處理。大部分蛋白用 G250 檢測的下限是 0.5 µg。雖然靈敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比 R250 染 色節(jié)省高達(dá) 11 h。

產(chǎn)品性質(zhì)

使用方法

1.標(biāo)準(zhǔn)染色步驟（考馬斯亮藍(lán) R250）

1）蛋白電泳凝膠置于 50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平搖床上低速搖動 30 min~過夜。

2）去除固定液，更換 0.25%考馬斯亮藍(lán) R250 染色液（0.25% R250 溶于 50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）*覆蓋住膠， 染色 2-4 h。直至膠染成均勻的藍(lán)色。注意：當(dāng)膠在染色液內(nèi)肉眼不可見時，說明染色完成，否則與深色的染色液對比，凝 膠區(qū)域看起來顏色偏淺。

3）將膠重新放置在 5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脫色 4-24 h。約 1-2 h 后蛋白條帶即可看到，直至背景變透明后脫 色才結(jié)束。中間可更換 2-4 次脫色液。 注意：此方法可檢測到的蛋白量最di達(dá)到 0.1 µg 蛋白/條帶。

4）將膠存放在 7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

2.快速染色步驟（考馬斯亮藍(lán) R250）

1）蛋白電泳凝膠在 25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定 30-60 min。

2）將膠放置在 10%醋酸的水溶液中進(jìn)行染色，含有 60 µg/mL 的考馬斯亮藍(lán) R250。約 30 min 后條帶顯示，讓膠繼續(xù)染色直 至達(dá)到理想的蛋白條帶。在此染色方法中膠的背景染色比較淺，由于使用膠的濃度很低。

3）將膠重新放在 10%醋酸溶液中脫色 2 h 或更長。期間可更換 2-4 次脫色液。 4）將膠存放在 7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

注意事項

1）0.25%考馬斯亮藍(lán) R250 染色液配置的過程中，需要先用甲醇溶解 R250 粉末后，再加入醋酸和水，一般情況下不需要濾 紙除雜。溶液可在 4℃存放 6 個月，若長時間保存出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過濾得到澄清液體。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！