TriZol 總RNA提取試劑

產(chǎn)品貨號(hào)：R1000

儲(chǔ)存條件：TriZol總RNA提取試劑在室溫下能穩(wěn)定保存12個(gè)月。我們建議保存在2~8°C的環(huán)境下。

重要提示：

本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會(huì)導(dǎo)致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)物品，如手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。

產(chǎn)品介紹：

TriZol 總RNA提取試劑是廣譜型總RNA 提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍廣泛，可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在TriZol總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠盡可能地保證RNA 的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會(huì)分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體外翻譯等。

TriZol總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之間(tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。

注意事項(xiàng)：

1.樣品用TriZol總RNA提取試劑勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1 年。RNA 半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA，Northern Blot 等。

2.若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感，建議用RNase free DNase I對(duì)RNA進(jìn)行處理。

3.自備試劑：氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇(用DEPC 處理過的水配制)、RNase free water或者DEPC 處理過的水。

4. 本公司生產(chǎn)TriZol總RNA 提取試劑Reagent 質(zhì)量優(yōu)異，可以替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取質(zhì)量和下游實(shí)驗(yàn)*一樣。

RNA 抽提操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）

提示：

用TriZol總RNA提取試劑抽提RNA 時(shí)要戴手套和護(hù)眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學(xué)通風(fēng)櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無特殊說明，所有的操作應(yīng)該在在15~30°C的室溫條件下。

1.勻漿

a. 植物組織：

取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織處理碎后直接在TriZol 總RNA提取試劑中迅速研磨，每50-100mg組織加入1ml TriZol總RNA提取試劑，混勻。注意：樣品體積一般不要超過TriZol總RNA提取試劑體積的10%。

b. 動(dòng)物組織：

取新鮮或-70℃凍存動(dòng)物組織盡量剪碎，每30-100mg組織加入1ml TriZol總RNA提取試劑，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；蛟谝旱醒心ズ蠹尤隩riZol總RNA提取試劑1ml混勻。注意：樣品體積一般不要超過TriZol總RNA提取試劑體積的10%。

c. 單層培養(yǎng)細(xì)胞：

盡量去除干凈殘留培養(yǎng)液后直接往直徑3.5 cm的培養(yǎng)板中加入1ml的TriZol總RNA提取試劑覆蓋并反復(fù)吹打裂解細(xì)胞。依據(jù)培養(yǎng)板的面積而不是依據(jù)細(xì)胞的數(shù)量來決定所需的TriZol總RNA提取試劑量（每10cm2加1ml）。當(dāng)TriZol總RNA提取試劑量不足時(shí)可導(dǎo)致抽提的RNA中污染有DNA。

注意：

貼壁培養(yǎng)細(xì)胞往往不能*從培養(yǎng)瓶（皿）脫落，這并不意味著裂解不*，此時(shí)細(xì)胞膜實(shí)際已經(jīng)*破裂開，并已釋放出全部RNA，繼續(xù)做即可。

d. 細(xì)胞懸液：

離心收集細(xì)胞。在TriZol總RNA提取試劑試劑中用移液管反復(fù)吹打來裂解細(xì)胞。每5~10×10⁶的動(dòng)物細(xì)胞，植物或酵母菌細(xì)胞或每1×107細(xì)菌加1ml的TriZol 總RNA提取試劑。在加入TriZol總RNA提取試劑前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞，因?yàn)槟菢訒?huì)增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細(xì)菌可能需要使用勻漿器。

f. 血液：

使用TriZol 總RNA提取試劑Reagent LS。

2.將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置5分鐘以使核蛋白體*解離。

3.可選步驟：

在4°C的條件下以12,000 rpm 的離心力離心10分鐘，取上清。

如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或肌肉，植物的塊莖結(jié)節(jié)等可離心去除。離心后的沉淀中包含有細(xì)胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織的樣品時(shí)，上層是大量油脂應(yīng)除去。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步。

4.每1ml TriZol 總RNA提取試劑加0.2ml 氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15 秒并將其在室溫下放置2~3 分鐘。

5.在4°C 12,000 rpm的離心力高速冷凍離心10-15分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色有機(jī)苯酚氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為所加TriZol總RNA提取試劑容量的50-60%。（有機(jī)層和中間層是蛋白和DNA，如果需要提取，請(qǐng)聯(lián)系我們索取提取方法）。

6.將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入等體積異丙醇。顛倒混勻后室溫放置10 分鐘。

RNA沉淀在離心前通常不可見，離心后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀。

7.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心10 分鐘，棄上清。

8.加入75%乙醇洗滌沉淀。每使用1 ml TriZol 總RNA 提取試劑用1 ml 75%乙醇對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌。

9.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心3分鐘，棄上清，注意不要丟失RNA沉淀。

注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。

10.室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA 保存在-70℃， 防止降解。

注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。