在使用技巧方面，首先要做好染料的選擇與配比。不同核酸染料的結(jié)合效率、熒光強度、毒性及適用場景存在差異，需根據(jù)實驗需求合理挑選。例如，SYBRGreenI適用于雙鏈DNA的常規(guī)檢測，靈敏度較高；EB（溴化乙錠）雖經(jīng)典但毒性較強，目前已逐漸被低毒染料替代。配比時需嚴(yán)格遵循說明書，精準(zhǔn)控制染料濃度——濃度過高易導(dǎo)致背景熒光過強，掩蓋目標(biāo)條帶；濃度過低則熒光信號微弱，無法清晰成像。建議采用“凝膠內(nèi)加樣”或“電泳后染色”兩種方式，凝膠內(nèi)加樣可簡化操作流程，電泳后染色則能減少染料對核酸遷移率的影響，可根據(jù)實驗精度要求選擇。

 

　　其次，要把控好染色與顯影的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。若采用電泳后染色，需將凝膠放入稀釋后的染料溶液中浸泡，浸泡時間通常為10-30分鐘，期間可輕輕晃動容器，確保染料與核酸充分結(jié)合。對于厚膠或高濃度凝膠，應(yīng)適當(dāng)延長浸泡時間。顯影時，需根據(jù)染料的熒光激發(fā)波長選擇對應(yīng)的光源，避免激發(fā)波長不匹配導(dǎo)致熒光信號衰減。同時，要控制曝光時間，短曝光可減少背景干擾，長曝光則能增強弱條帶的可見度，需通過預(yù)實驗找到最佳曝光參數(shù)。

 

　　注意事項是實驗安全與結(jié)果可靠的重要保障。第一，嚴(yán)格做好防護措施。多數(shù)核酸染料具有毒性，部分還可能致癌，實驗時需佩戴一次性手套、口罩和實驗服，避免直接接觸皮膚和呼吸道。若染料不慎沾染皮膚，應(yīng)立即用大量清水沖洗；若不慎誤食或吸入，需及時就醫(yī)。第二，規(guī)范處理實驗廢棄物。染液、染色后的凝膠及相關(guān)耗材均屬于危險廢棄物，不可隨意丟棄，需收集到專用的有害廢棄物容器中，交由專業(yè)機構(gòu)處理，防止污染環(huán)境。

 

　　第三，注重染料的儲存與穩(wěn)定性。核酸染料多對光敏感，需密封保存在避光、低溫環(huán)境中，避免光照和高溫導(dǎo)致染料降解，影響使用效果。同時，要注意染料的保質(zhì)期，過期染料可能出現(xiàn)熒光強度下降、特異性降低等問題，應(yīng)及時更換。第四，避免干擾因素影響實驗結(jié)果。實驗過程中需使用無核酸酶的耗材，防止核酸降解；染色容器需清潔干凈，避免殘留雜質(zhì)與染料結(jié)合，產(chǎn)生假陽性信號。